生物dna的粗提取与鉴定汇总

实验原理

dna在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/l时，dna的溶解度最大，浓度为 0.14 mol/l时，dna的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的dna析出。

dna不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的dna。

dna中含有脱氧核糖，能与二苯胺(沸水浴)反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定dna的试剂。

目的要求

1. 学会dna的粗提取和鉴定的方法。

2. 观察提取出来的dna物质的颜色和形状。

材料用具

材料：活鸡或鲜血鸡血。

仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简(100 ml，l个)，烧杯(100 ml，l个，50 ml、500 ml各 2个)，试管(20 ml，2个)，漏斗，试管夹，纱布。

试剂：酒精的体积分数为95%的溶液(实验前置于冰箱内冷却24 h)，蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为 0.1g/ml的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为 2 mol/l和0.015 mol/l的溶液，二苯胺试剂。

方法步骤

实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成)，制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 0.1 g/ml的溶液(抗凝剂)100 ml，置于500 ml烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血(约180 ml)注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用 1000 r/min的离心机离。2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离。心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。

1.提取鸡血细胞的细胞核物质

将制备好的鸡血细胞液5 ml～10ml，注入到50 ml烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 ml，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500ml。取其滤液。

2.溶解细胞核内的dna

将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40ml加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时dna在溶液中呈溶解状态。

3.析出含dna的粘稠物

沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水(这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol/l)。

4.滤取含dna的粘稠物

用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500ml的烧杯中，含 dna的粘稠物被留在纱布上。

5.将dna的粘稠物再溶解

取 1个 50 ml烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/l的溶液 20ml。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。

6.过滤含有dna的.氯化钠溶液

取1个100 ml烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，dna溶于滤液中。

7.提取含杂质较少的dna

在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95%的溶液 50ml(使用冷却的酒精，对dna的凝集效果较佳)，并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是dna 。注意观察丝状物是什么颜色的。

的鉴定

取两支20 ml的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0.015 mol/l的溶液5 ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mll的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。将观察的结果填写在《实验报告册》上。

结论

步骤8的2支试管中溶液颜色的变化说明了什么?将得出的结论填写在《实验报告册》上。

讨论

1.提取鸡血中的dna时，为什么要除去血液中的上清液?

2.步骤回和步骤3中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗?为什么?

的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个dna分子直径的大小?

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